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第3章 绪论

一、组织学与胚胎学的研究内容与意义

掌握嗜酸性、嗜碱性、嗜中性的含义。

了解组织学、胚胎学的研究对象和学习这门课程的目的。

组织学与胚胎学是独立而又相互关联的两门学科。组织学(histology)是研究机体的微细结构及其与功能关系的科学,研究内容包括细胞、组织、器官和系统。胚胎学(embryology)是研究个体在母体内发生和生长发育规律的科学。

组织学与胚胎学是一门重要的基础医学课程。它与医学其他学科均有密切联系。只有了解人体组织、细胞的微细结构,才能深入理解其生理功能和疾病的发生机制、病理变化等,只有熟悉人体胚胎发育的过程,才能正确地诊断和治疗男性不育、女性不孕、先天畸形等疾病。因此,掌握好组织学与胚胎学知识,可为学习其他各学科奠定坚实的基础。

二、组织学与胚胎学的研究技术

(一)光学显微镜技术

光学显微镜技术是一种常用技术。借助光学显微镜放大组织切片观察到的细胞组织微细结构,称光镜结构。切片制作程序:取人或动物的新鲜组织标本,入固定剂(如乙醇或甲醛溶液),使组织中蛋白质迅速凝固,以尽可能保持其自然结构,此过程称为固定。固定后的标本经冲洗、脱水、浸蜡、切片等步骤后进行染色。最常用的染色方法是苏木精(hematoxylin)和伊红(eosin)染色,简称HE染色。苏木精是碱性染料(它的盐溶液具正电荷),伊红为酸性染料(其盐溶液具负电荷)。如果某结构或物质被苏木精着色染成蓝紫色,称嗜碱性;被伊红染成粉红色,称嗜酸性;与碱性和酸性染料亲和力均不强者,则称为嗜中性。

此外,还可以把组织直接置于低温下冰冻,直接进行切片、染色,称为冰冻切片法。该法常用于酶的组织化学研究及病理快速诊断。

血液(或体液等)可直接涂在载玻片上进行染色称涂片法;坚硬组织(如骨、牙齿等)可用磨片法;一些软组织(如疏松结缔组织)可用铺片法。

(二)电子显微镜技术

1.透射电子显微镜技术

透射电镜(TEM)是以电子束代替光源,以电磁透镜代替光学透镜,经聚焦放大后,显像于荧光屏上进行观察和摄像。电镜的分辨率可达0.2nm,放大倍数可达几十万倍。

2.扫描电子显微镜技术

扫描电镜(SEM)用于观察组织细胞的表面立体结构。标本表面先后喷镀一层碳膜和金属膜,即可置于电镜下观察。

在电子显微镜下看到组织细胞更细的结构,称电镜结构。

(三)组织化学和细胞化学技术

组织化学(histo chemistry)和细胞化学(cyto chemistry)是通过化学反应或物理反应的原理显示组织细胞内某种化学成分,并可进行定位、定量研究。如欲检测组织细胞内的多糖类,可用过碘酸-Schiff反应(PAS反应),其基本原理是多糖经过碘酸(HIO4)氧化成多醛,后者与Schiff试剂(无色品红)结合形成紫红色沉淀物,沉淀物形成部位则表示多糖存在的部位,颜色反应的深浅取决于组织内多糖的量。

(四)免疫组织化学技术

免疫组织化学(immunohisto chemistry)技术是应用抗原与抗体特异性结合的原理,检测组织细胞内多肽和蛋白质等大分子物质的技术。分离和纯化人或动物某种组织的蛋白质,作为抗原免疫动物,即可制备相应的特异性抗体。将这种抗体用荧光素、铁蛋白、酶等标记,用这种标记的抗体孵育标本,标记抗体即与细胞的相应蛋白质(抗原)发生特异性结合。这种方法称为直接法。另一种方法是间接法:将分离的抗体(一抗)作为抗原免疫另一种动物,制备该抗体的抗体(二抗),然后对二抗进行标记。先后用一抗和标记二抗处理组织标本,最终形成抗原—一抗—标记二抗复合物。间接法由于二抗的放大作用而较直接法敏感性高。目前常用的间接法有过氧化物酶—抗过氧化物酶复合物法(PAP法)和亲和素—生物素—过氧化物酶复合物法(ABC法)。

(五)原位杂交组织化学技术

原位杂交组织化学(in situ hybridization histo chemistry)简称原位杂交,可在组织细胞原位检测核酸分子。其基本原理是两条互补的单核苷酸链可紧密结合形成稳定的杂交体。碱基序列已知的标记核苷酸链称为探针,常用的标记物分放射性和非放射性两类。放射性标记物用放射自显影术显示,非放射性标记物可用组织化学术显示。

(六)细胞培养技术

将人或动物体的活细胞在体外适宜的环境中(如温度、pH值、营养等)培养生长的技术称为细胞培养技术。细胞培养技术可应用于细胞增殖、分化、代谢、吞噬及癌变机制等多方面的研究,获得体内实验难以达到的目的,已成为细胞学研究的重要手段之一。

三、学习组织学与胚胎学的方法

(一)理论联系实际

组织学与胚胎学属形态学范畴。学习过程中不仅要学好理论,而且要认真做好实验。通过实验可验证和巩固所学理论,并能提高独立思考能力和自学能力。

(二)发挥想象,建立立体与动态的概念

在组织学与胚胎学教学中,所用标本大多为切片标本,同一结构因切面和取材的时间不同可呈现不同的形态。因此,在观察切片时,应通过细胞、组织、器官平面结构的观察,从二维结构认识它们立体结构,从静止的结构发现其动态变化的规律。

(三)结构和功能的关系

细胞、组织、器官的形态结构是功能的基础。在学习过程中,要从形态联系功能,从功能理解形态。如肌细胞是细长的,含有大量肌丝,是为了维持其较大的舒缩潜能;单层扁平上皮表面平滑,分布于血管、淋巴管内腔面,具有降低摩擦力的作用。因此,注意结构与功能的结合,有助于理解,便于记忆。

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