临床上对通过直肠指检、经直肠月超检查及悦栽检查等尚不能明确诊断的前列腺内可疑结节，为了进一步明确诊断，可考虑行细胞学检查。目前，穿刺活检是前列腺癌最常用的检查方法，临床大多采用经直肠穿刺，穿刺前须进行直肠消毒，可以用活检穿刺针取组织块或用细针穿刺细胞学检查，其临床诊断正确率高达豫以上。如果有条件，可在经直肠超声探头的引导下进行穿刺活检，可避免盲目性，准确率高，这种方法对病人痛苦较小，容易被接受，但由于该技术要求比较高，如果抽得的前列腺细胞较少，可造成假阴性结果，从而延误患者的早期诊断。如果患者有无痛性血尿，临床高度怀疑前列腺部尿道有恶性病变时，可进行经尿道活检或切除术。
过去国外曾经大量采用开放性经会阴和耻骨后前列腺活检术，因病人痛苦大、出血多，虽然诊断正确率较高，如今已很少使用。目前，国内外最常用的是细针抽吸细胞学检查，该方法具有痛苦小，出血少，简单易学和安全等优点，目前已成为许多医院诊断前列腺癌的首选方法，但操作者必须是熟练的泌尿外科医生和病理科医生，否则假阴性率较高，会延误前列腺癌的早期诊断。
